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        主頁 &amp;gt; 技術服務 &amp;gt; AccuITSTM真菌絕對定量測序檢測

        AccuITSTM真菌絕對定量測序

        AccuITSTM真菌絕對定量測序檢測

        服務介紹:

          微生物廣泛存在于人類、動物、植物及生態環境中,它們在人類和動物的疾病、生物化學養分循環、植物營養及生態環境等方面調節中存在極其重要的影響。近年來,qPCR絕對定量和常規擴增子測序技術的聯合使用成為獲得細菌絕對豐度和微生物群落結構的主要研究手段。qPCR絕對定量技術是對樣品目的基因進行qPCR檢測,根據已知起始拷貝數的標準品做出標準曲線,計算樣品總菌絕對拷貝數,然后結合常規擴增子測序得出的各物種相對豐度,計算出物種對應的絕對豐度。該方法將“擴增子測序”與“定量”完全割裂開來,優勢在于實驗靈活,可有選擇地對樣本進行絕對定量分析。但qPCR 絕對定量技術對樣品質量要求較高,尤其對PCR抑制劑敏感,而這卻是土壤/腸道等微生物研究的主要對象無法規避的問題,所以,常規的qPCR絕對定量實驗不再適用于組成較為復雜的環境樣本微生物絕對定量。
          由于上述方法的局限性,如何將微生物群落結構和微生物絕對定量有機結合起來從而同時獲得微生物群落結構和物種絕對拷貝數是目前微生物研究領域的一個技術趨勢,同時對樣本微生態的分析研究工作更具有重大意義。微生物擴增子絕對定量測序技術是一種能夠將qPCR絕對定量技術和常規擴增子測序技術完美合二為一的技術。該方法通過向樣品DNA中添加一定量spike-in standards人工合成序列,進行ITS擴增子文庫構建、測序,再根據spike-in standards 的ITS擴增子reads數及其絕對拷貝數繪制標準曲線,計算出樣品中OTU代表序列對應真菌物種絕對拷貝數。
          在2019年,公司成功推出了細菌16S絕對定量產品,市場反響熱烈,累計至今項目已超過百余項。在實際的項目洽談中我們發現,有很多老師更關心真菌而不是細菌菌落組成及豐度,有的則是以真菌與細菌為共同的研究對象,來探討它們之間的互作關系,這些老師都要求檢測真菌的絕對定量。我們克服了諸如樣本真菌ITS拷貝數通常較低、非特異片段擴增較多、實驗穩定性與準確性要求更高等技術難點,成功研發了AccuITSTM真菌絕對定量測序技術。

        技術參數及分析內容

        技術優勢:

          • 數據量大:平均10萬reads/樣品,可檢測環境微生物群落中的痕量菌,以及發現新的微生物。
          • 方案經濟便捷:單個真菌ITS擴增子測序可同時獲得環境樣本中微生物的組成信息和絕對定量數據。
          • 適用范圍廣:運用真菌絕對定量可同時得到環境樣本中絕大多數優勢真菌物種的絕對定量數據,該方法具有普遍適用性。
          • 真實、準確:絕對定量數據,測序結果真實,客觀還原菌群結構及豐度比例,無樣品偏差可直接比較。

        技術優勢:

          • 微生物菌種絕對定量
          • 微生物菌群進化分析
          • 微生物菌群豐度分析
          • 環境與生態研究

        技術參數


        技術路線圖



        服務流程



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